AKTA蛋白纯化仪器的操作流程主要包括以下步骤：

1. 开机与预热：打开仪器主电源和电脑，待仪器自检完成（指示灯稳定）后，双击UNICORN软件进入操作界面，等待系统连接就绪。
2. 准备工作液与样品：所有缓冲液需用0.45μm滤膜过滤并超声脱气10-15分钟；样品需经0.22μm滤膜过滤或高速离心取上清，避免堵塞系统。
3. 清洗泵与管道：将A（平衡液）、B（洗脱液）等泵头插入对应溶液，通过软件选择“泵清洗”功能，冲洗泵及管路，确保无气泡残留。
4. 安装层析柱：设置低流速（如1mL/min），待进液管流出液体后连接柱上端（稍松），液体从柱下端流出后连接出液管并拧紧，避免柱内进气泡。同时根据柱填料耐受压力设置报警压力（参考说明书）。
5. 平衡柱子：用平衡缓冲液冲洗柱子，直至紫外、电导、pH基线稳定（通常需2-3个柱体积）。
6. 上样与洗脱：上样前紫外调零；样品通过进样环或泵注入（体积需≥环体积2倍）；上样后用平衡液冲洗至基线，再按梯度洗脱条件分离目标蛋白。
7. 系统清洗与维护：实验结束后，用纯水冲洗泵和柱子至基线平稳（防盐结晶）；长期不用时，用20%乙醇清洗系统和柱子（防微生物滋生）。定期校准pH计（每月）、清洗紫外流动池（每季度）。

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