蛋白纯化仪AKTA的操作流程主要包括以下步骤：

1. 准备与检查：使用前检查硬件连接（USB线、电源线、废液管），确认各部件正常；所有缓冲液、样品需经0.22-0.45μm滤膜过滤，缓冲液需超声脱气。
2. 开机与软件启动：先开AKTA主机电源，待指示灯稳定后启动电脑，打开UNICORN软件并登录（默认用户/密码），进入系统控制界面。
3. 泵与管路清洗：将A/B泵进液管放入纯水或平衡液，通过软件执行“Pump Wash”功能清洗泵头及管路，避免气泡残留。
4. 安装层析柱：设置低流速（如1.0mL/min），待管路出液后连接层析柱（先接柱头，后接柱尾），注意拧紧前排尽气泡；根据柱子/填料耐受压力设置报警压力（通常≤0.3MPa）。
5. 平衡柱子：切换至目标缓冲液（如平衡液），以设定流速平衡柱子至电导、pH基线稳定（约2-3个柱体积）。
6. 上样与洗脱：样品过滤后，通过上样环或泵上样；上样后继续用平衡液冲洗至基线平稳，再切换洗脱缓冲液（如高盐或梯度洗脱），设置收集参数（每管体积）收集目标蛋白峰。
7. 系统清洗与保存：纯化结束后，用纯水冲洗泵、管路及柱子至基线平稳；长期不用时，换20%乙醇冲洗并保存系统，防止微生物滋生。
8. 关机：退出UNICORN软件，关闭主机电源及电脑。

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