蛋白纯化仪AKTA的使用注意事项主要包括以下几点:
- 使用前准备:需将缓冲液用0.45微米滤膜过滤并超声脱气,样品同样需0.45微米滤膜过滤或高速离心取上清;打开系统电源预热至室温(一般为室温),确保各模块连接正确。
- 系统排气:检查进液管路气泡,少量气泡可通过泵洗(选择对应管路执行“pump wash”)排除;若气泡未排尽,需用注射器在泵头阀门处辅助抽气。
- 参数设置:根据实验需求设定流速(如1mL/min)和柱压(参考GE蛋白纯化柱表,不超最高限制),设置梯度洗脱条件;样品泵压力建议设为0.3MPa。
- 样品处理与加载:样品加载前确保无颗粒杂质,通过进样阀注入色谱柱;运行时监控UV检测器等数据,按设定收集目标蛋白分馏。
- 系统清洗与维护:实验结束后,用纯化缓冲液反复清洗注射器、色谱柱(必要时用2M NaCl再生);关闭电源后,用超纯水冲洗各模块并保持干燥;长期不用时,泵头管路需浸泡于20%乙醇中防菌。
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