蛋白纯化仪AKTA的操作流程主要包括以下步骤：

1. 开机前检查：确认USB连接线、电源线连接正常，废液管置于废液缸中。
2. 开机与软件启动：先开AKTA主机电源（待Power灯稳定后），再开电脑并启动UNICORN软件，选择用户登录进入系统。
3. 系统准备：
   • 清洗泵：将A/B泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗后放入目标缓冲液（如分子筛缓冲液），通过软件执行泵清洗程序。
   • 脱气处理：工作溶液需经0.45μm滤膜过滤，含有机溶剂的缓冲液需超声脱气10分钟。
   • 参数设置：设定流速（通常1mL/min）、柱压（参考层析柱/填料说明书，如XK16/70柱设0.3MPa），紫外调零。
4. 安装层析柱：低流速下（如0.5-1mL/min），待进样阀出口流出液体后连接柱上端，卸下柱下端堵头接入检测器管路，避免气泡进入。
5. 平衡柱子：用平衡缓冲液冲洗2-3个柱体积，至电导、pH值稳定。
6. 样品处理与上样：样品经高速离心（12000rpm，3min）取上清，用注射器清洗样品环（2倍环体积）后注入样品；或通过泵直接上样（切换A泵至样品管，上样后换回平衡液）。
7. 洗脱与收集：设置梯度洗脱程序（如10CV内从0%-100%洗脱液），设定收集体积（通常1mL/管）及起始收集水平（如10mAU），自动收集目标蛋白峰。
8. 清洗与保存：用纯水冲洗系统管路，再切换至20%乙醇冲洗并保存泵头及管路；拆柱时先堵下端（滴水时拧紧），再堵上端，避免气泡。
9. 关机：退出UNICORN软件，关闭主机电源及电脑。

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