蛋白纯化仪器AKTA的操作流程如下：

1. 开机与系统连接：打开AKTA主机电源，待仪器自检完毕（指示灯稳定），打开电脑并双击Unicorn软件（如Unicorn 7.0等），进入登录界面，使用默认用户名和密码（通常为Default/default）登录系统，等待计算机与仪器连接完成（约3 - 5分钟），系统会弹出System Control（主操作窗口）、Evaluation（数据处理窗口）、Administration（系统设置窗口）。

2. 准备工作液与样品：所有缓冲溶液和样品需经过0.45μm滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清，含有机溶剂的缓冲液需超声脱气10分钟，确保溶液无杂质和气泡。

3. 洗泵与管道清洗：将泵头从20%乙醇中取出，用超纯水冲洗后放入对应缓冲液（如分子筛缓冲液），在System Control界面通过Manual - Execute Manual instructions - Pumps - Pump Wash功能清洗泵头及管路，可选择所需泵（如A1、B1等），清洗完成后仪器自动恢复初始状态。

4. 设置系统参数：根据使用的纯化柱型号，在System Control界面设置合适的流速（如1mL/min，参照“GE蛋白纯化柱表”，不超最高限制）和柱压报警值（Alams - Alarm System Pressure - High Alarm），确保仪器安全运行。

5. 安装层析柱：在低流速（如0.5 - 1mL/min）下，待进液管流出液体后连接柱子上端（进样阀出口），待柱子下端流出液体并充满检测器连接口后连接下端，确保连接紧密无气泡，避免影响分离效果。

6. 平衡柱子：用对应缓冲液（如分子筛buffer）以设定流速平衡柱子，一般需2小时左右，直至基线平稳，盐离子浓度等参数稳定（如达到5.5%左右）。

7. 样品处理与上样：样品离心（12000rpm，3min）去除沉淀后转移至新离心管，重复一次；用注射器吸取样品（＜2mL），排出气泡后从进样口注入Loop环，注意操作轻柔避免气泡进入，上样后切换进样阀至Inject状态，用缓冲液冲洗Loop环。

8. 洗脱与收集：根据纯化介质特性设定洗脱梯度，使用合适洗脱缓冲液冲洗柱子，去除杂质后用高浓度洗脱液使目标蛋白解离；设置收集体积（如1mL/管，可根据实际调整）和收集水平（初次纯化设低水平如10mAU），按信号强度自动收集目标蛋白组分。

9. 清洗与维护：纯化结束后，先用超纯水清洗泵和柱子直至基线平稳，长期不用需用20%乙醇清洗系统和柱子，防止微生物滋生；定期校准PH计（每月一次）、清洗紫外流动池（每三个月一次），维护仪器性能。

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