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蛋白纯化的常见方法有哪些?

56 浏览 2025-05-17

蛋白纯化的常见方法主要包括沉淀法、层析法、电泳法、超滤和透析、高效液相色谱(HPLC)、磁性分离、温度循环、金属螯合亲和层析等。沉淀法包含盐析、有机溶剂沉淀、酸碱沉淀,分别通过改变离子强度、添加有机溶剂、调节pH值使蛋白质沉淀;层析法有凝胶过滤层析(依据分子大小分离)、离子交换层析(基于电荷差异分离)、亲和层析(利用特异性结合分离,常用于带His标签的重组蛋白纯化)等;电泳法如SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳等可根据蛋白质的大小或等电点进行分离;超滤和透析通过半透膜按分子大小分离或去除小分子杂质;高效液相色谱包含反相、尺寸排阻、离子交换等类型;磁性分离通过磁性颗粒结合目标蛋白快速分离;温度循环利用蛋白质稳定性差异使杂质沉淀;金属螯合亲和层析利用蛋白质与金属离子亲和性纯化带His标签蛋白。

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