蛋白纯化仪AKTA的操作流程主要包括以下步骤：

1. 开机准备：先打开AKTA主机电源，待控制面板指示灯稳定后启动电脑，双击UNICORN软件（如7.0/7.4版本）登录系统，进入主操作窗口（System Control）。

2. 工作液与样品处理：所有工作溶液（平衡液、洗脱液等）需经0.45μm滤膜过滤，含有机溶剂的缓冲液需超声脱气10min；样品需高速离心取上清或过滤，避免堵塞系统。

3. 清洗管道：将A、B泵头（或样品泵）插入超纯水或目标溶液（如平衡液），通过软件执行“Pump Wash”功能清洗泵及管路，确保无气泡残留。

4. 安装层析柱：设置低流速（0.5-1mL/min）和压力限制（参考柱子耐受压力），待进样阀出口流出液体后连接柱上端，再卸下柱下端堵头接入检测器管路，避免气泡进入。

5. 平衡柱子：用平衡缓冲液冲洗柱子至电导、pH基线稳定（约2小时），确保柱内环境与目标蛋白结合条件一致。

6. 上样与洗脱：

   • 上样：样品经0.22μm滤膜过滤后，用注射器注入样品环（需2倍环体积冲洗）或通过泵直接上样；
   • 洗脱：上样后用平衡液冲洗至基线平稳，设置梯度洗脱（如目标B液浓度100%，10CV洗脱），启动收集程序（设定每管1mL等参数）。

7. 清洗与保存：纯化结束后，用纯水冲洗泵及管路；长期不用时，将泵头插入20%乙醇溶液，执行清洗程序保存系统，防止微生物滋生。

8. 关机：退出UNICORN软件，关闭主机电源，最后关闭电脑。

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