蛋白纯化的常用方法主要包括以下几类：

1. 沉淀法：通过改变溶液条件（如离子强度、pH值等）使蛋白质溶解度降低而沉淀。常见的有盐析（如硫酸铵沉淀）、等电点沉淀（利用蛋白质在等电点时溶解度最低的特性）和有机溶剂沉淀（如甲醇、乙醇在低温下降低蛋白质溶解度）。

2. 层析法：利用蛋白质与固定相的亲和力差异实现分离，是精细纯化的核心方法。包括：

   • 亲和层析：基于目标蛋白与特异性配体（如镍离子与His标签）的高亲和力结合，适用于高纯度分离；
   • 离子交换层析：利用蛋白质在特定pH下的带电性差异，通过与带相反电荷的树脂吸附实现分离；
   • 凝胶过滤层析（分子排阻层析）：根据蛋白质分子大小差异，大分子先流出，小分子后流出；
   • 疏水作用层析：利用蛋白质表面疏水性差异，在高离子强度下吸附于疏水树脂，降低盐浓度后洗脱。

3. 电泳法：如SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），通过电场作用按蛋白质亚基大小分离，常用于分析或小规模制备。

4. 离心分离：利用蛋白质在离心力场中的沉降差异（与质量、密度相关）进行粗略分离，常作为前处理步骤。

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