蛋白纯化仪AKTA的操作步骤主要包括以下环节： 一、准备工作 1. 硬件检查：确认USB连接线、电源线连接正常，废液管置于废液缸； 2. 溶液与样品处理：所有缓冲液需用0.45μm滤膜过滤并超声脱气，样品需过滤或离心取上清。 二、开机与系统启动 1. 打开AKTA主机电源，待控制面板指示灯稳定后启动电脑，双击UNICORN软件登录； 2. 进入系统控制（System Control）界面，检查各模块状态。 三、管路清洗与排气 1. 将A/B泵管路放入超纯水或平衡液，通过“Pump Wash”功能清洗泵头并排除气泡； 2. 若气泡未排尽，可手动用注射器辅助抽气（如泵头阀门或进样阀V1接口）。 四、安装层析柱与参数设置 1. 设置低流速（如1mL/min）和限压（参考填料/柱子耐受压力）； 2. 待进液管流出液体后连接柱上端，液体从柱下端流出时连接检测器，避免气泡进入。 五、平衡与上样 1. 用平衡液冲洗柱子至电导、pH稳定； 2. 紫外调零后上样（可选择样品环或泵上样，上样量需≥2倍环体积）。 六、洗脱与收集 1. 设置梯度洗脱程序（如目标B液浓度100%，洗脱体积10CV）； 2. 设定组分收集参数（每管体积、起始收集水平），开始洗脱并收集目标蛋白。 七、系统清洗与关机 1. 用纯水冲洗泵、管路及柱子至基线平稳； 2. 长期不用时，用20%乙醇冲洗系统保存； 3. 拆卸柱子时先堵下端再堵上端，防止气泡； 4. 退出UNICORN软件，关闭主机及电脑电源。 注：AKTA等蛋白层析系统的稳定运行离不开专业维护。匠析生物作为实验仪器全周期服务商，提供Thermofisher、Cytiva（原GE）等品牌的蛋白层析系统维修、租赁、清灰保养服务，同时供应配套耗材、备件及色谱应用咨询，助力实验高效开展。