aktapure蛋白纯化仪的纯化效果主要受以下因素影响:
- 样品特性:蛋白浓度(包括目的蛋白与杂蛋白的总量)会直接影响280nm吸光值,若杂蛋白含量高会干扰纯化效果;样品预处理(如离心去除沉淀)不足可能导致系统堵塞,影响纯化效率。
- 纯化策略:需明确目标蛋白的纯度、活性及产量标准,采用捕获(高效分离浓缩)、中度纯化(去除大部分杂质)、精细纯化(高分辨率分离)三步策略,步骤过多会增加产量损失。
- 层析柱选择:需结合蛋白性质(如电荷、亲和力)选择离子交换层析、亲和层析等类型,综合考虑回收率、分辨率、速度及容量等因素。
- 缓冲液与检测条件:缓冲液的pH、电导等参数需适配目标蛋白特性;紫外(280nm为主)、电导、pH等检测器的准确性直接影响纯化过程监控。
- 操作流程:上样时需避免气泡,Loop环清洗、样品注射等操作规范程度会影响系统稳定性及分离效果。
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