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蛋白纯化的常用方法有哪些

96 浏览 70 赞同 2026-01-07

蛋白纯化的常用方法主要包括以下几类:

  1. 亲和层析法:利用生物分子间的特异性结合原理,如镍柱纯化(His标签与镍离子配位结合,通过咪唑竞争性洗脱)、GST柱纯化、MBP柱纯化及抗体亲和纯化等,适用于带特定标签或具有特异性结合特性的目标蛋白分离。
  2. 离子交换层析:基于蛋白质在特定pH条件下的带电性质差异,通过与带相反电荷的树脂吸附实现分离。
  3. 疏水作用层析:利用蛋白质表面疏水性差异,在高盐环境下与疏水介质结合,降低盐浓度后洗脱。
  4. 凝胶过滤层析(分子排阻层析):根据蛋白质分子大小不同,大分子先流出,小分子后流出,实现分离。
  5. 溶液分离法:包括超滤(通过半透膜分离不同分子量物质)、离心(利用沉降速率差异)及沉淀(改变溶液条件使目标蛋白沉淀)等,常用于粗分离或缓冲液更换。
  6. 电泳法:如凝胶电泳,基于蛋白质电荷和大小差异在电场中迁移速率不同进行分离。

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