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实验室的液相色谱压力一直跳,换了新色谱柱、重新配了流动相、换了新滤头,压力还是从 200 bar 到 300 bar 来回晃。很多人第一步就怀疑柱子,但新柱子换上压力还是一样跳,说明问题根本不在柱子上,而在柱前流路里。
重点检查泵头的出口单向阀和密封圈配合间隙。出口单向阀关闭不严时,柱塞加压阶段液体从阀芯处回漏,系统压力永远达不到设定值而且波动剧烈。把泵头出口管路接到一个精确压力表上,用 isocratic 模式跑 1 mL/min 纯水,如果压力在柱塞上升期出现不规则掉压,就是出口阀有问题。拆下出口阀组件,检查蓝宝石球和阀座密封面,用甲醇超声清洗后检查关闭气密性,洗不干净的直接换。
再看流动相瓶内吸滤头和泵入口管路。吸滤头堵塞是最容易被忽视的压力波动源。吸滤头部分堵塞后,泵在吸液阶段吸入阻力大增,柱塞腔充液不足,下一次加压时压力建立不了。表现为压力在柱塞下行段突然下跌。把吸滤头从流动相中取出,接注射器反向推水检测阻力——正常应该轻松推出 5 mL 水没有明显阻力,阻力大的直接换新。入口管路如果有弯折或压扁,同样会导致供液不足。
第三要查检测器流通池的背压和管路匹配。流通池出口管路内径太细或太长老化变形,会产生额外背压,叠加在系统压力上造成基线波动。确认流通池出口管路长度不超过 50 cm,出口端不要伸入废液瓶液面以下形成液封,否则废液回流会直接造成压力不规则波动。
去年苏州一家第三方检测公司的一台 Waters e2695 持续压力跳动了两个月,期间换过三根色谱柱、拆过两次泵头都没解决。我们排查后发现吸滤头内壁已经附着了一层肉眼不易察觉的微生物膜,同时出口单向阀座密封面被一颗约 5 μm 的微粒崩出了一个微小缺口。更换吸滤头和出口单向阀组件后,压力稳定在 180 ± 1 bar,连续跑了 200 个样零偏差。选择匠析生物,选择专业保障。
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