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纯化跑着跑着电导值不稳定,收集到的目的蛋白跟电泳条带对不上,做了一天的亲和层析等于白干。很多人第一反应是进系统做电导标定,但标定了几次还是飘——根本问题不在传感器上。
温度补偿管道的液体残留是最容易忽略的原因。ÄKTA系统的电导测量自带温度补偿,但如果流路里残留了上次跑的高盐缓冲液,残留液体会跟当前的低盐缓冲液在电导池里局部混合,造成电导读数忽高忽低。用纯水充分冲洗系统至少10倍柱体积,再看电导是否稳定。
电导池内壁结垢是第二个高发问题。长期跑含Tris-HCl或磷酸盐缓冲液后,池壁会附着白色垢层导致电导响应变慢。拆下电导池用1M NaOH浸泡30分钟再冲洗,电导稳定性通常会明显改善。注意电极片很脆弱,别用硬物刷洗。
空气泡卡在电导池里造成读数大幅跳变。看电导池中间是否有可见气泡——如果安装垂直度不够或流速太低,气泡排不出去。直接把流速提到5mL/min运行一两分钟,气泡冲出去电导就稳了。
园区信诺维一台ÄKTA pure 25的电导一直偏高0.8mS/cm,工程师检查发现是Tris缓冲液残留加上电导池轻微结垢。CIP清洗后电导误差降到0.05mS/cm以内,后续纯化出来的蛋白峰完全吻合。
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