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AKTA Start 跑纯化最容易卡在压力上限:进样没多久就报高压、泵自动暂停,样品在室温泵腔里等一个多小时,热不稳定蛋白失活,整批纯化只能推倒重来。
定位要从下游往上游做。先分清柱前还是柱后堵:拆下 色谱柱 走水,系统压力若回到 3 bar 以内,说明堵塞在柱端,即填料或柱 筛板 被颗粒、脂浊拦住;若仍高,问题在 滤器、泵头 或 阀件。样品必须经 0.45 μm(高黏度用 0.22 μm)针头滤器 处理,未过滤的裂解液是堵柱第一原因。其次查进液与出液的 单向阀 及 密封圈 磨损,压力波动会触发保护性报警,混合室 气泡同理;最后确认 背压阀 设定与管路有无折叠。
上个月我们在苏州一家外泌体治疗团队的实验室处理 AKTA Start 高压报警:柱前压力 3.2 MPa 触发停机,筛板 表面可见白色挂壁。更换柱 筛板 与 单向阀 密封圈、加装前置 保护柱 后,压力稳定在 1.1 MPa,连续 12 针未再报警。
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