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AKTA Start 上样品加载后压力从正常的 0.5 MPa 直接跳到 3~5 MPa,随后触发高压报警自动停机,正在分层的批次中断,纯化到一半的蛋白样品悬在柱里温度过长,活性下降甚至整批报废,这种压力异常在换缓冲液或处理不清亮样品时最常见。
排查应先判断是柱床堵塞还是流路结晶。最直接的证据是拆下色谱柱,用纯水或 20% 乙醇反向冲洗,若回压恢复到正常区间,问题就在 柱头滤板 与填料;若泵端空转压力仍高,再查流路。接着检查进样阀和 mixer 之后的管路,尤其是盐浓度高的缓冲液在接头死角析出结晶,可用 10% 异丙醇低压分段 Push,某一段阻力明显增大即定位堵点,必要时拆开 比例阀 出口逐段通气确认。别忘了 紫外检测池 与背压管:背压管过细或被压折同样会造成假性高压,而池入口滤网被蛋白聚集物糊住时,压力曲线会整体抬高一截。
上个月我们在苏州一家做重组蛋白的生物企业遇到一台 AKTA Start,层析时柱压从 0.6 MPa 升到 2.8 MPa 后保护停机。现场检查发现是样品中脂类杂质堵塞了 柱头滤板,加上前一位使用者配错高浓度 NaOH 使填料表层压紧;更换滤板、筛除聚集颗粒并用 20% 乙醇再生填料后,1 mL/min 流速下压力稳定在 0.55 MPa,回收率恢复到 82%,峰形不再拖尾。
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