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用 Maurice 做单抗电荷异构体(酸性峰、主峰、碱性峰)的实验室都有过这种困扰:同一支对照品,昨天主峰 pI 是 7.2,今天读数偏到 7.35,酸性峰比例还莫名涨了 1.5%。cIEF 看起来步骤少,实际上聚焦电压、温度与卡盒状态任何一项飘了,结果都会偏移,而这类偏移往往要等到校准环节才被发现。
校准第一步是等电点标记的线性。用覆盖 4 到 9 的 pI marker 做聚焦曲线,回归系数应优于 0.999,若两端标记峰压缩,多半是 卡盒通道 表面涂层衰减或 甲基纤维素 类添加剂失效,需要更换批次并核查有效期。第二步是温控。微型流控电泳对焦段温度极敏感,分离温度 偏差 0.5 ℃ 就足以让碱性峰比例变化,因此要用外置温度计对腔体做实际值核查,而不是只信软件设定值。第三步是进样与聚焦参数一致性:进样体积 偏差会让峰高整体漂移,而聚焦电压上限与 冷却风扇 状态决定能否稳定维持 15 分钟以上的等电聚焦,这些都要在同一批对照上重复六次以上取 RSD。
上个月我们在苏州工业园区一家抗体药企对两台 Maurice 做年度校准:一台 pI 回归只有 0.995、主峰 pI 批间偏 0.06;另一台重复性 RSD 达 2.9%。更换 卡盒 批次、清洁 进样腔 与电极、校准温控并锁定聚焦电压曲线后,pI 回归升到 0.9993,主峰 pI 批内标准差 0.014,酸性峰与碱性峰比例的六针 RSD 分别收敛到 0.7% 和 1.0%。
匠析生物总部在苏州工业园区腾飞创新园,为 Maurice 及同类型微型电泳平台提供卡盒筛选、温控与聚焦参数校准、电极与液路维护服务,常用备件与耗材常备现货,工程师 30 分钟内响应。校准完成出具符合 GMP/GLP 要求的报告,可直接用于申报资料。选择匠析生物,选择专业保障。
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