蛋白纯化仪AKTA的操作流程主要包括以下步骤：

1. 准备工作：配置实验所需缓冲液（需0.45μm滤膜过滤并超声脱气），处理样品（0.45μm滤膜过滤或高速离心取上清）；检查硬件连接（USB线、电源线、废液管是否到位）。
2. 开机与初始化：打开AKTA主机电源预热，待自检完成后启动电脑及UNICORN软件，选择用户并登录系统。
3. 清洗与排气：将A/B泵管路放入缓冲液，通过软件“Pump Wash”功能清洗泵头及管路；若有残留气泡，可用注射器辅助排出。
4. 参数设置：在“System Control”窗口设置流速（一般1mL/min）、柱压报警值（根据柱子/填料耐受压力，如凝胶柱通常0.2-0.3MPa），完成紫外调零。
5. 安装层析柱：待进液管流出液体后，先连接柱上端（稍松），待液体从柱下端流出后连接下端并拧紧，避免气泡进入。
6. 平衡柱子：用缓冲液平衡至电导、pH值稳定（约2小时），确认基线平稳。
7. 上样与洗脱：选择样品环或泵上样（样品需过滤/离心），设置梯度洗脱条件，通过“Fraction Collection”设定收集体积，启动洗脱程序。
8. 系统清洗与保存：实验结束后，用纯水冲洗泵和柱子至基线平稳；长期不用时，换20%乙醇冲洗并保存管路及柱子。
9. 关机：退出UNICORN软件，关闭AKTA主机电源及电脑。

操作注意事项：需严格遵循柱压限制，避免气泡进入系统；定期校准pH计（每月）和清洗紫外流动池（每季度）。

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