蛋白纯化仪AKTA的操作流程主要包括以下步骤：

1. 开机与系统检查：确认USB连接线、电源线连接正常，废液管置于废液缸中。先打开AKTA主机电源，待控制面板指示灯稳定后启动电脑，双击UNICORN软件登录（默认用户Default，密码default），进入系统控制主界面。

2. 洗泵与排气：将A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗后放入目标缓冲液（如分子筛缓冲液），通过软件手动操作（System Control→Manual→Pumps→Pump A wash）清洗泵头，排除管路气泡。

3. 参数设置：设置柱压报警（参考柱子耐受压力，如预装柱通常0.3MPa）、系统流速（一般1mL/min，不超过柱子最高限制），并校准紫外检测器（Monitors→Auto zero UV）。

4. 装柱与平衡：连接色谱柱时，先确保进液管液体流出，将柱上端与进样阀出口连接（避免气泡），下端连至检测器；用目标缓冲液平衡柱子（约2个柱体积），观察电导、pH基线稳定。

5. 上样与洗脱：样品需0.22μm滤膜过滤或离心去沉淀，用注射器注入进样环（体积≥环体积2倍）。切换进样阀至Inject状态，启动洗脱程序（如梯度洗脱），设置收集参数（每管1mL，起始收集水平10mAU）。

6. 清洗与关机：实验结束后，用超纯水冲洗泵、管路及柱子至基线平稳，长期不用时换20%乙醇保存系统。关闭软件，先拆柱下端堵头（防气泡），再拆上端，最后关闭主机和电脑电源。

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