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Agilent 1260 液相色谱进样重复性差,最直接的表现就是峰面积 RSD 从正常的 0.5% 一路飙到 2% 以上,同一批样品连续进六针,峰面积忽高忽低,方法学验证直接卡壳,已经处理好的样品只能重配重跑。
遇到这种情况,先查 进样针与针座密封。针尖磨损或针座密封垫老化,会导致部分样品在进样瞬间渗漏,表现为低浓度样品 RSD 更差。拆下针座检查密封垫是否有压痕、变形,用放大镜看针尖有无毛刺或弯钩,有则直接更换。其次查 六通阀转子密封。转子密封磨损后切换不到位,部分流路短路,峰面积会随机波动,判断方法是做压力测试,观察切换瞬间压力波动是否超过 5 bar,超了就要换转子密封。第三查 计量泵与柱塞杆密封。计量泵密封圈老化会造成吸液量不准,尤其影响小体积进样,拆下柱塞杆看密封圈是否发硬、开裂,同时检查计量泵是否有气泡,必要时排气并更换密封圈。
上个月我们在苏州工业园区一家生物药企就处理过类似故障,一台 Agilent 1260 的峰面积 RSD 从 1.8% 降到 0.4%,进样位置偏差从 0.8 mm 修正到 0.05 mm 以内。拆检发现针座密封垫已明显压扁,六通阀转子密封也有划痕,更换这两处密封件并重新校准进样针位置后,连续六针 RSD 稳定在 0.3% 左右,方法学验证一次通过。
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